肼苯哒嗪对人骨肉瘤细胞的生长抑制及对WWOX基因的调控作用研究

作     者：李甲振 徐宗潮 张岩 卢新昌 石海龙 刘永奎 Li Jiazhen;Xu Zongchao;Zhang Yan;Lu Xinchang;Shi Hailong;Liu Yongkui

作者机构：郑州大学第一附属医院骨科450052 

出 版 物：《中华骨科杂志》 (Chinese Journal of Orthopaedics)

年 卷 期：2014年第34卷第5期

页      面：593-597页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：骨肉瘤 肼苯哒嗪 脱氧胞苷-磷酸 基因 肿瘤抑制 

摘      要：目的通过观察肼苯哒嗪、5’-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷酸（5’-aza-2’deoxycytidine，5-Aza-CdR）及其联合使用对人成骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用，并检测对骨肉瘤细胞中WWOX基因表达的调控作用，初步明确肼苯哒嗪对骨肉瘤细胞的作用机制。方法取对数生长期的人骨肉瘤细胞株MG-63制成细胞悬液，计数板计数5×10^4个，ml，加入96孔板。分为肼苯哒嗪组（药物浓度为0．1、1．0、10μmol／L）、5-Aza-CdR组（药物剂量为5、10、20μmol／L）、肼苯哒嗪联合5-Aza-CdR组f药物剂量为0．1μmol／L＋5μmo／L、1．0μmol／L＋10／μmol／L、10μmol／L＋20μmol／L）及对照组（培养基）。噻唑蓝（M1Tr）比色法检测药物对MG．63细胞生长抑制作用；流式细胞仪检测药物对细胞周期分布作用及凋亡影响；Real-TimePCR技术检测WWOXmRNA表达改变情况；Western-blot检测药物处理后各组细胞中WWOX蛋白表达水平。结果肼苯哒嗪、5-Aza-CdR及其联合应用对MG-63细胞的增殖均有明显抑制作用，且呈浓度依赖性并与作用时间相关；联合应用较单用抑制作用明显增强，且各组差异有统计学意义。肼苯哒嗪、5-Aza-CdR可诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡，联合应用时诱导凋亡作用加强。肼苯哒嗪、5-Aza-CdR对骨肉瘤MG-63细胞中WWOX基因表达有促进作用，联合作用使WWOX表达明显增强。结论肼苯哒嗪可明显抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导其凋亡，并促进WWOX基因的表达，其作用机制可能为肼苯哒嗪能够使抑癌基因WWOX基因甲基化状态逆转，表达增加，从而抑制MG-63细胞的增殖。