氯化两面针碱对人食管癌Eca109细胞抑制作用及机制研究

作     者：袁翠林 娄诤 谢璐迪 王大维 YUAN Cui-lin;LOU Zheng;XIE Lu-di;WANG Da-wei

作者机构：杭州市萧山区中医院浙江杭州311201 浙江中医药大学第二临床医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2019年第50卷第20期

页      面：4969-4973页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 1002[医学-临床医学] 0703[理学-化学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81373633) 浙江省自然科学基金资助项目(LY18H270014) 

主　　题：氯化两面针碱 Eca109细胞 cleaved Caspase-3 Bcl-2 p53 Noxa 

摘      要：目的探讨氯化两面针碱对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其诱导凋亡的分子机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的氯化两面针碱不同的干预时间对Eca109细胞的增殖抑制率。依据CCK-8法的结果将实验设4组,各组氯化两面针碱的终浓度分别为0、5、10、15μmol/L,药物作用时间为48 h。以AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测凋亡率;以实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测Caspase-3、Caspase-9和Noxa的m RNA表达;采用Westernblotting法检测cleaved Caspase-3、Bcl-2、p53和Noxa的蛋白表达水平。结果氯化两面针碱对Eca109细胞具有增殖抑制作用,一定范围内呈时间和浓度依赖性。流式细胞术结果显示,5μmol/L的氯化两面针碱主要诱发早期凋亡(P0.01);10、15μmol/L的氯化两面针碱主要诱发的是晚期凋亡(P0.01)。q RT-PCR结果显示,Caspase-3、Caspase-9和Noxa的m RNA表达均随氯化两面针碱的浓度增加而升高,其中10、15μmol/L组升高比较显著。Western blotting法结果显示,cleaved Caspase-3、p53和Noxa的蛋白水平均随氯化两面针碱浓度的增加而升高(P0.01),但Noxa的升高在5μmol/L组不显著,在10、15μmol/L组升高明显(P0.01);Bcl-2蛋白的表达随着氯化两面针碱浓度的升高而降低,10、15μmol/L组较为显著(P0.05、0.01)。结论氯化两面针碱对Eca109细胞的增殖抑制作用主要是通过诱导凋亡实现的,氯化两面针碱诱导Eca109细胞的凋亡与p53和Noxa的表达升高和Bcl-2的下调以及Caspase-3的活化有关。