人羊水来源干细胞参与小鼠损伤肌肉修复的实验研究

作     者：马晓荣 张胜利 尚亚峰 高同斌 王雪 陈方 周君梅 

作者机构：上海交通大学附属上海市儿童医院中心实验实上海200040 上海交通大学附属上海市儿童医院小儿泌尿外科上海200040 上海交通大学医学院附属新华医院泌尿外科上海200040 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2011年第25卷第7期

页      面：842-847页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：上海市科学技术委员会基金资助项目(08JC1416000) 

主　　题：人羊水来源干细胞 细胞治疗 骨骼肌损伤 小鼠 

摘      要：目的研究人羊水来源干细胞(human amniotic fluid colony derived stem cells,hAFCSCs)是否参与小鼠肌肉损伤修复过程,探讨应用hAFCSCs治疗肌肉损伤的方法及可行性。方法 B超引导下穿刺抽取人孕中期羊水,体外分离、培养得到hAFCSCs,取第6～8代细胞备用,同时提取总RNA行RT-PCR鉴定干细胞相关基因。取16只6～8周龄Nod/Scid小鼠,体重20～24 g,利用心肌毒素联合X线照射建立双侧胫骨前肌肌肉损伤模型,右侧胫骨前肌内注射hAFCSCs(3.3×107个/mL)30μL作为实验组,左侧胫骨前肌同法注射等量完全培养液(含15%FBS、18%Chang B、2%Chang C、1%青链霉素、1%L-谷氨酰胺的α-MEM培养基)作为对照组。细胞移植术后2、4周各处死小鼠8只,取材行肝细胞生长因子受体(c-Met)、成肌调节因子(Myf-5)、层粘连蛋白(Laminin)、结蛋白(Desmin)与人特异性细胞核有丝分裂器(NuMa)组织免疫双重荧光染色观察。结果原代hAFCSCs培养5～7 d后可见细胞克隆形成;8～10 d后可挑取细胞形态均一的克隆进行稳定传代,6～8代后可获得足量的干细胞。RT-PCR检测示所获得hAFCSCs体外扩增培养至第6代仍表达干细胞相关基因。细胞移植术后2周免疫双重荧光染色示,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,未检测到hAFCSCs表达肌源性细胞相关表型;术后4周,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,部分细胞同时表达NuMa和c-Met、Myf-5,部分肌纤维同时表达NuMa和Desmin、Laminin。术后2、4周,对照组胫骨前肌均未检测到NuMa表达。结论 hAFCSCs体外培养后移植到小鼠肌肉损伤部位,可参与损伤肌肉的修复过程。