甲硫氨酸γ-裂解酶基因在大肠杆菌中的高效表达和活性

作     者：胡海艳 杜少平 夏枫耿 黄魁英 周世宁 HU Hai-Yan;DU Shao-Ping;XIA Feng-Geng;HUANG Kui-Ying;ZHOU Shi-Ning

作者机构：广州市微生物研究所广东广州510663 中山大学生命科学学院生物防治重点实验室广东广州510275 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2019年第46卷第12期

页      面：3225-3232页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：广州市科技计划科学研究专项(201607010326)~~ 

主　　题：宏基因组文库 Idiomarina 甲硫氨酸γ-裂解酶 诱导表达 重组蛋白纯化 

摘      要：【背景】为了开发海洋蕴藏的新型微生物资源,本研究团队采用不依赖培养的宏基因组技术,构建了深海宏基因组文库,并对其中的重要基因进行后续研究。【目的】使用来自深海宏基因组文库中的甲硫氨酸γ-裂解酶基因(mgl)在大肠杆菌中高效表达并对其活性进行检测。【方法】将mgl基因克隆到表达载体pET-28a(+)并转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,并对表达条件进行优化,获得甲硫氨酸γ-裂解酶(Methionine-lyase,r MGL)的大量表达。亲和层析纯化重组蛋白后对酶的活性进行研究。【结果】亲和纯化后获得大量表达蛋白r MGL,大小与预测的46 kD相符合,并具有很高的裂解L-甲硫氨酸的活性。rMGL能催化L-甲硫氨酸和DL-同型半胱氨酸的裂解,但几乎不作用于L-半胱氨酸和L-胱氨酸,其中对DL-同型半胱氨酸的催化效率比对L-甲硫氨酸的催化效率高,相对活性约为对L-甲硫氨酸催化效率的1.4倍。【结论】来自深海宏基因组文库中的mgl基因能够利用p ET-28a(+)/BL21(DE3)高效表达rMGL。