白细胞介素10受体突变引起新生儿期炎症性肠病的发病机制及基因诊断

作     者：许永彬 陈玉冰 曾萍 陈慧珊 曾华松 Xu Yongbin;Chen Yubing;Zeng Ping;Chen Huishan;Zeng Huasong

作者机构：广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心风湿免疫科510623 广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心消化科510623 

出 版 物：《中华儿科杂志》 (Chinese Journal of Pediatrics)

年 卷 期：2015年第53卷第5期

页      面：348-354页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：广州市科技计划重点项目(2012J4100031) 

主　　题：炎症性肠病 新生儿 白细胞介素10受体α亚单位 突变 

摘      要：目的 对2例新生儿期发病的炎症性肠病（IBD）进行白细胞介素（IL）-10受体基因诊断,并探讨其发病机制.方法 研究对象为广州市妇女儿童医疗中心2010至2014年新生儿科和消化内科住院的2例疑诊新生儿期IBD同胞兄弟.先证者男,26 d,3.73 kg,出生后第9天出现反复发热,大便次数增多于2014年入院.先证者兄,6个月时因反复黏液脓血便5个月余,发热5d于2010年入院,8个月死亡.采用PCR方法扩增先证者及其父母和姐姐IL-10受体基因组DNA,本院儿童保健科健康体检儿童的资料作为对照组.采用反转录PCR扩增先证者IL-10受体α亚单位（IL-10RA）,PCR产物进行双向序列测定,Western分析先证者IL-10RA蛋白以及IL-10刺激后磷酸化信号转导和转录激活因子3（P-STAT3）蛋白的表达.分离外周血单个核细胞（PBMC）并予脂多糖＋IL-10刺激培养后酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子（TNF）-α水平.结果 先证者及其兄均为IBD患者,基因组测序发现IL-10RA突变位点均为c.537GA为同义突变,突变位点位于外显子4和内含子4连接处即CG/GT突变为CA/GT,先证者反转录PCR产物T-A克隆测序发现（c.519-537delGGTGCCGGGAAACTTCAC ***173ASNfs＊7）,证实为剪接突变.另外一条DNA链基变位点为（c.668GC,p.C223S）,两个突变均为新基因突变,患儿父母均为突变基因的携带者,先证者及其兄均为复合杂合隐性遗传突变引起.Western印迹分析表明先证者和正常者均可表达IL-10RA,但是IL-10RA下游功能明显缺陷,IL-10刺激后下游P-STAT3无表达.先证者PBMC予脂多糖＋IL-10共刺激培养12 h后TNF-α为（2 100±356） ng/L,明显高于对照者[（200 ±50） ng/L,t=9.154,P=0.001].IL-10对炎症的负反馈调节功能严重受损.结论 IL-10受体突变能够引起婴儿早期IBD,包括新生儿溃疡性结肠炎和克罗恩病,此型常规治疗效果较差,必须尽早诊断,尽早进行造血干细胞移植.