黑龙江林蛙ISSR反应体系的建立与优化

作     者：杨洪雁 张宜强 杜智恒 白秀娟 YANG Hongyan;ZHANG Yiqiang;DU Zhiheng;BAI Xiujuan

作者机构：东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 

出 版 物：《东北农业大学学报》 (Journal of Northeast Agricultural University)

年 卷 期：2012年第43卷第6期

页      面：121-125页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071002[理学-动物学] 

基　　金：东北农业大学博士启动基金 

主　　题：黑龙江林蛙 正交设计 体系优化 ISSR-PCR体系 

摘      要：以黑龙江林蛙为材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、DNA聚合酶、模板进行体系优化,对引物的最佳退火温度进行选择,建立适合黑龙江林蛙的ISSR-PCR分析的最佳体系:在25μL总体积中,包含10×PCR Buffer 2.5μL,Mg2+4.0 mmol.L-1,dNTPs 0.15 mmol.L-1,引物0.3μmol.L-1,TaqDNA聚合酶0.5 U,DNA模板2.0 ng.μL-1,最佳退火温度53.8℃。为利用该技术对黑龙江林蛙遗传多样性分析和构建遗传图谱提供一定的依据。