竞争性RT-PCR法及对大肠杆菌acrA基因mRNA表达水平的定量研究

作     者：陈爱美 陈仪本 CHEN Ai-mei;CHEN Yi-ben

作者机构：广东省微生物研究所 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2007年第47卷第2期

页      面：235-239页

核心收录：

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 071005[理学-微生物学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：广东省科技攻关项目(2005B32401006) 广东省科学院分析测试基金(SF2005005)~~ 

主　　题：acrA 定量竞争性RT-PCR 外排系统 

摘      要：建立了用于检测大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922的acrA基因mRNA表达水平的定量竞争性RT-PCR(QC-RT-PCR)体系。PCR合成目标片段的突变型片段(321bp)作为内标准模板(Internal standard,IS),与目标片段一致的片段(389bp)作为目标模板(Target standard,TS),优化两种模板共扩增体系;梯度稀释IS与等量大肠杆菌cDNA样本共扩增,扫描电泳条带,软件分析数据。结果表明,引物设计合适,以IS和TS为模板实现共扩增,产物(321bp和389bp)通过1.5%琼脂糖凝胶电泳有效分离;梯度稀释IS与cDNA共扩增产物出现亮度梯度电泳条带;获得一元回归曲线y=-0.345+0.097x(相关系数r=0.959,标准差s=0.05997)。该研究成功构建内标准模板,优化的共扩增PCR体系实现了对大肠杆菌ATCC25922中acrA基因mRNA表达水平的检测,具有简便、高效、敏感度高等优点。