以FOXP3为靶点的免疫抑制剂药物筛选模型的建立
Screening model for immuning inhibitors as target for transcription factor FOXP3作者机构:中国医学科学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050 中国医学科学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)病毒室北京100050 中国医学科学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)药理室北京100050
出 版 物:《中国医药生物技术》 (Chinese Medicinal Biotechnology)
年 卷 期:2011年第6卷第1期
页 面:2-6页
学科分类:1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床]
主 题:免疫抑制剂 T淋巴细胞,调节性 转录因子 启动区(遗传学) 遗传载体
摘 要:目的构建以FOXP3为靶点的免疫抑制剂筛选模型,用于筛选免疫抑制剂。方法以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增人类FOXP3基因启动子,将扩增的启动子DNA片段克隆至pGeneBLAzer-TOPO载体,以PCR方法确定插入片段方向,选取有正向片段的质粒克隆进行测序鉴定,用Lipofectine2000转染Jurkat细胞株,经G418抗性筛选获得阳性细胞克隆,通过PCR扩增鉴定阳性细胞克隆基因组中整合有FOXP3启动子/pGeneBLAzer-TOPO载体。以阳性对照前列腺素-2(PGE2)和PMA/Ionophore刺激细胞,探讨FOXP3启动子对下游报告子β-内酰胺酶活性的影响,并筛选了研究所内约2500余种天然产物。结果通过PCR成功扩增人类FOXP3基因启动子全长区域,构建了FOXP3启动子/pGeneBLAzer-TOPO载体,以PCR方法鉴定稳定转染细胞株Jurkat细胞基因组中整合有FOXP3启动子/pGeneBLAzer-TOPO载体,探讨了阳性对照PGE2和PMA/Ionophore对FOXP3基因启动子活性的影响,建立了以FOXP3为靶点的免疫抑制剂药物筛选模型,筛选了研究所2500余种天然产物,获得4个对FOXP3基因启动子具有上调作用的天然产物。结论建立了以FOXP3为靶点的免疫抑制剂筛选模型。