Pfu酶原核的高效表达及其活性分析

作     者：袁跃 胡晶 王友如 YUAN Yue;HU Jing;WANG You-ru

作者机构：湖北师范学院生命科学学院湖北黄石435000 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2012年第22卷第5期

页      面：29-31页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：pfu DNA聚合酶 高效表达 大肠杆菌 活性 

摘      要：目的:在大肠杆菌中高效表达重组Pfu酶。方法:将pfu基因构建于载体pET28a上,重组质粒pET28a-pfu转化DH5α,获得了含pET28a-pfu重组表达菌株。在重组菌株OD600为0.2时,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达10～12 h后,菌体超声波破壁后,80℃条件下热变性30 min去除部分杂蛋白;粗酶液再经Ni离子亲和层析进一步纯化。结果:获得了高纯度的重组Pfu酶,利用该酶成功扩增出目的基因片段。结论:纯化的Pfu酶具有较高的活性,比活性为62 500 U/mg,该研究表达的重组酶完全可以替代商用Pfu酶。