人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关基因表达及青蒿琥酯的作用

作     者：肖亮 贺光照 余泽浩 唐小清 任玉涵 XIAO Liang;HE Guang-zhao;YU Ze-hao;TANG Xiao-qing;REN Yu-han

作者机构：重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400016 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2013年第29卷第2期

页      面：185-190页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主　　题：瘢痕疙瘩 成纤维细胞 青蒿素类 钙 钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶 分化抑制因子1 

摘      要：目的 验证瘢痕疙瘩Fb中是否存在钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）和分化抑制因子1（ID1）的异常表达，观察青蒿琥酯对二者的影响。方法 收集笔者单位患者手术后废弃的瘢痕疙瘩样本15个和正常皮肤组织样本12个，采用组织微粒贴壁法行Fb原代培养，取第3~8代细胞用于实验。免疫荧光染色观察2种Fb中CASK和ID1的表达，瘢痕疙瘩Fb用不同浓度青蒿琥酯作用不同时间，通过噻唑蓝比色法确定药物的半数抑制浓度（IC50）并作为后续实验药物干预浓度。选取正常皮肤Fb设为正常对照组（添加培养液处理），收集瘢痕疙瘩Fb分为瘢痕对照组（添加培养液处理）及瘢痕给药组（添加含IC50青蒿琥酯的培养液处理），流式细胞术检测各组Fb细胞周期和凋亡的变化，RT-PCR、蛋白质印迹法检测各组Fb中CASK和ID1的基因与蛋白表达情况。对数据行单因素方差分析及LSD-t检验。结果 瘢痕疙瘩和正常皮肤Fb中均存在CASK和ID1表达，选择75 mg/L青蒿琥酯为后续实验干预浓度。（1）G0/G1期和G2/M期的细胞百分比3组之间比较，差异有统计学意义（F值分别为118.064、163.840，P值均小于0.01）。其中瘢痕给药组G0/G1期为（91.4±1.4）%，明显高于瘢痕对照组的（80.7±0.3）%和正常对照组的（82.4±0.6）%（t值分别为12.740、9.872，P值均小于0.05）；G2/M期为（6.9±0.3）%，明显低于瘢痕对照组的（13.7±0.3）%和正常对照组的（12.7±0.8）%（t值分别为43.702、12.276，P值均小于0.05）。（2）早晚期细胞凋亡率3组之间比较，差异均有统计学意义（F值分别为61.879、4710.862，P值均小于0.01）。其中瘢痕给药组早期凋亡率为（7.1±1.0）%，明显高于瘢痕对照组的（2.6±0.4）%和正常对照组的（2.7±0.3）%（t值分别为7.974、7.767，P值均小于0.05）；晚期凋亡率为（14.9±0.3）%，明显高于瘢痕对照组的（2.3±0.3）%和正常对照组的（2.5±0.4）%（t值分别为72.882、69.792，P值均小于0.05）。（3）瘢痕对照组CASK基因表达量为0.658±0.024，低于正常对照组的1.076±0.008（t=28.997，P〈0.01）；瘢痕给药组的基因表达量为0.855±0.008，较瘢痕对照组上升（t=13.549，P〈0.01）。瘢痕对照组CASK蛋白表达量为0.067±0.007，低于正常对照组的0.179±0.015（t=12.042，P〈0.01）；瘢痕给药组为0.132±0.010，较瘢痕对照组上升（t=9.498，P〈0.01）。（4）瘢痕对照组ID1基因表达量为0.416±0.006，高于正常对照组的0.317±0.020（t=8.299，P〈0.01）；瘢痕给药组为0.217±0.009，较瘢痕对照组下降（t=32.417，P〈0.01）。瘢痕对照组ID1蛋白的表达量为0.789±0.034，高于正常对照组的 0.366±0.029（t=16.341，P〈0.01）；瘢痕给药组为0.114±0.006，较瘢痕对照组下降（t=33.978，P〈0.01）。结论 推测CASK和ID1参与了瘢痕疙瘩Fb的增殖过程，青蒿琥酯抑制瘢痕疙瘩Fb增殖的机制可能与上调CASK和下调ID1表达有关。