Tet-On基因表达系统定量调节荧光素酶基因在CHO细胞中的表达

作     者：伏爽 程康 王申五 马大龙 王德炳 FU Shuang;CHENG Kang;WANG Shenwu;MA Dalong;WANG Debing

作者机构：北京医科大学人民医院血液病研究所 北京医科大学分子免疫学研究中心 

出 版 物：《北京医科大学学报》 (Journal of Peking University(Health Sciences))

年 卷 期：1998年第30卷第6期

页      面：512-514,554页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金："九五"国家科技攻关项目 

主　　题：Tet-On基因 基因表达调控 荧光素酶基因 CHO细胞 

摘      要：目的：应用ＴｅｔＯｎ基因表达系统建立ＣＨＯＴｅｔＯｎ细胞株，通过强力霉素（Ｄｏｘ）调节荧光素酶基因的表达。方法：ｐＴｅｔＯｎ质粒转染ＣＨＯ细胞株，经Ｇ４１８筛选，得到稳定表达株ＣＨＯＴｅｔＯｎ。ｐＴＲＥＬｕｃ质粒瞬时转染ＣＨＯＴｅｔＯｎ克隆１至３０，培养基中加入２ｍｇ·Ｌ－１Ｄｏｘ或不加Ｄｏｘ，培养７２ｈ后检测荧光素酶活性。结果：克隆１８、２８、２９当培养基中加入Ｄｏｘ（即“Ｏｎ状态）时荧光素酶活性高，当培养基中不加Ｄｏｘ（即“Ｏｆ状态）时荧光素酶活性低，故选择克隆１８、２８、２９作为高表达、低背景的ＣＨＯＴｅｔＯｎ细胞株。结论：ＣＨＯＴｅｔＯｎ细胞株的建立，可利用四环素及其衍生物调节多种外源基因的表达，有效调控基因表达的时间和水平，定量诱导毒性蛋白的表达，增加治疗的疗效和安全性，有望为基因治疗提供一条可控的安全途径。