中国对虾6种组织cDNA文库的构建
Construction of cDNA libraries from Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis作者机构:中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室山东青岛266071
出 版 物:《海洋学报》 (ACTA OCEANOLOGICA SINICA)
年 卷 期:2005年第27卷第5期
页 面:92-95页
核心收录:
学科分类:0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种]
基 金:国家高技术研究发展计划("863"计划)资助项目(2002AA628030 2003AA603440) 国家自然科学基金资助项目(30230280)
摘 要:以中国对虾血液、眼柄、卵巢、雌虾头胸部、雄虾头胸部和三倍体对虾头胸部组织为材料,采用异硫氰酸胍一酸酚法提取总RNA;用磁珠法纯化mRNA;用UniZAPcDNA合成试剂盒合成双链cDNA并进行修饰,将cDNA定向连接在UniZAP载体上;经Gigapack GoldPackage包装试剂盒包装成为噬菌体颗粒,转染宿主XLl Blue MRF’菌株细胞,形成初级文库.初级文库经转染进一步扩增,形成稳定的cDNA文库.6个文库的库容在0.2×10^6~1.3×10^6之间,重组率都超过90%.从各文库随机取出6~10个清晰的噬菌斑进行PCR扩增,用琼脂糖凝胶电泳检测,其插入片段长度为500~2500bp.由初步功能基因克隆获得阳性结果.多项指标表明,所构建的对虾cDNA文库质量较高,为进一步筛选目的基因、EST测序和制作基因芯片提供了有效的工具.