发酵饲料中乳酸菌含量检测的EMA-qPCR方法

作     者：胡会龙 魏小兵 王秋霞 欧长波 闫艺婷 吕玉琼 刘兴友 HU Huilong;WEI Xiaobing;WANG Qiuxia;OU Changbo;YAN Yiting;LV Yuqiong;LIU Xingyou

作者机构：河南科技学院动物科技学院新乡453003 畜禽智能化清洁生产河南省工程实验室新乡453003 新乡学院新乡453003 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2019年第50卷第10期

页      面：2166-2170页

核心收录：

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：河南省现代农业产业技术体系生猪产业技术创新团队(S2012-06-G02) 国家重点研发计划(2016YFD0500702) 河南省科技开放合作项目(182106000043) 

主　　题：叠氮溴乙锭 实时荧光定量PCR 乳酸菌含量 

摘      要：旨在快速检测发酵饲料中乳酸菌含量,将叠氮溴乙锭(EMA)与q-PCR技术相结合,通过对诸如EMA浓度、曝光时间等影响EMA的因素进行探索,确定EMA的作用条件。在试验条件下用EMA处理已知浓度的乳酸菌菌液,提取乳酸菌DNA,结合q-PCR建立Ct值与乳酸菌含量对数值之间的标准曲线。利用标准曲线,快速计算发酵饲料中的乳酸菌含量。结果表明EMA浓度在3~4μg·mL-1曝光10min可有效抑制死菌DNA的扩增,从而消除死菌DNA扩增对Ct值的影响。通过对8份发酵饲料进行检测,其结果与平板计数具有较高的符合度。EMA-qPCR方法可用于快速准确地检测发酵饲料中活的乳酸菌含量。