细胞角蛋白18的基因克隆及其对Hep G2肝癌细胞增殖迁移的影响

作     者：孙达权 周莉莉 石松 薛殿婷 徐莹莹 Sun Daquan;Zhou Lili;Shi Song;Xue Dianting;Xu Yingying

作者机构：贵州医科大学基础医学院 

出 版 物：《遵义医学院学报》 (Journal of Zunyi Medical University)

年 卷 期：2019年第42卷第4期

页      面：383-387页

学科分类：07[理学] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO:81560390) 贵州省科学技术基金资助项目(NO:黔科合基础1147) 

主　　题：肝癌细胞 细胞角蛋白18 细胞增殖 细胞迁移 

摘      要：目的克隆人细胞角蛋白18基因(C K18)编码区并构建重组真核表达载体pEBFP-C K18,研究其对Hep G2肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法以Hep G2细胞mRNA为模板,用RT-PCR扩增CK18基因蛋白编码区,并插入真核表达载体pEBFP-C1中,构建重组质粒pEBFP-CK18。重组质粒用脂质体法稳定转染Hep G2细胞,并用G418筛选出稳定表达外源蛋白CK18的单克隆稳转肝癌细胞株,蛋白免疫印迹检测胞内蛋白表达情况。实时无标记细胞分析和细胞划痕-愈合实验分别评估稳转细胞的增殖和迁移能力。结果成功获得CK18基因蛋白编码区并构建重组真核表达载体pEBFP-CK18。获得单克隆稳转肝癌细胞株并高表达外源融合蛋白BFP-CK18。发现CK18高表达不影响Hep G2细胞生长,但能够促进细胞迁移。结论研究表明CK18对肝癌细胞Hep G2的迁移具有促进作用。