牙龈卟啉单胞菌血凝集素黏附结构域ha2基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化

作     者：曾凤娇 杨琳 刘建国 田源 陈靖 白国辉 Zeng Fengjiao;Yang Lin;Liu Jianguo;Tian Yuan;Chen Jing;Bai Guohui

作者机构：遵义医科大学研究生院贵州遵义563099 贵州省普通高等学校口腔疾病研究特色重点实验室贵州遵义563099 贵阳市口腔医院贵州贵阳550002 

出 版 物：《遵义医学院学报》 (Journal of Zunyi Medical University)

年 卷 期：2019年第42卷第4期

页      面：378-382页

学科分类：1003[医学-口腔医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO:81560186) 贵州省科技厅计划项目(NO:黔科合基础SY字1333) 遵义市科技计划项目(NO:遵义市科合HZ字21) 贵州省科学技术项目(NO:黔科合J字LKZ15) 

主　　题：原核表达质粒 ha2基因 包涵体 纯化 

摘      要：目的在原核表达质粒pET21a-ha2成功构建的基础上,诱导目的基因在大肠杆菌中表达,进行表达产物的纯化及鉴定。方法原核表达质粒pET21a-ha2经PCR鉴定后,转入大肠杆菌Rosetta感受态细胞诱导筛选,经SDS-PAGE电泳检测,IPTG诱导表达。通过包涵体的变复性、Millipore超滤系统的滤浓缩、Ni-TA层析分离纯化HA2蛋白。结果原核表达质粒pET21a-ha2转化大肠杆菌经IPTG诱导后,成功表达HA2蛋白,大小约15 kD,与预计目的蛋白大小相同。HA2纯化蛋白浓度为0.449 mg/mL,经测序与NCBI蛋白数据库比对无突变。结论pET21a-ha2可在大肠杆菌中成功表达,并成功得到纯化的HA2蛋白。