猪圆环病毒1型反向遗传操作系统的初步构建

作     者：王伟丞 曾智勇 汤德元 刘钊 

作者机构：贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州省动物疫病研究室贵阳550025 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第5期

页      面：124-126页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：贵州省农业科技攻关项目(黔科NY(2010)3042) 

主　　题：猪圆环病毒1型 反向遗传 PCR 双酶切 感染性克隆 

摘      要：为构建猪圆环病毒1型的反向遗传操作系统,试验参考GenBank中已发表的PCV1序列,设计1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV1全长基因组,将其定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,并对其进行PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定;将构建好的重组质粒转染到PK-15细胞中,经3次连续传代后,用PCR方法检测转染后盲传细胞中PCV2核酸,经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。结果表明:构建的PCV1感染性克隆具有感染性。PCV1反向遗传操作系统的成功建立为进一步研究PCV基因组的功能及新型疫苗的研发奠定了基础。