靶向黏着斑激酶siRNA表达载体构建及转染Tca8113细胞的沉默效应

作     者：刘华联 江宏兵 邢树忠 刘来奎 王子露 郑阳玉 LIU Hualian;JIANG Hongbing;XING Shuzhong;LIU Laikui;WANG Zilu;ZHENG Yangyu

作者机构：南京医科大学口腔医学院口腔颌面外科.口腔医学研究所210029 

出 版 物：《实用口腔医学杂志》 (Journal of Practical Stomatology)

年 卷 期：2008年第24卷第1期

页      面：13-16页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：南京医科大学科技发展基金重点项目(编号:2006025) 江苏省卫生厅科研项目(编号:H200636) 

主　　题：黏着斑激酶 舌癌细胞 RNA干扰 

摘      要：目的:构建靶向黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒表达载体,转染人舌癌细胞Tca8113后观察其对FAK表达的抑制作用。方法:根据siRNA的设计原则,在人FAK mRNA序列中,设计并合成2条特异性靶序列寡核苷酸及2条无关对照序列,经退火成互补双链,再克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo真核表达载体中,构建重组体pSilencer-FAK并进行酶切鉴定;转染重组质粒至Tca8113细胞中,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞系;运用免疫细胞化学和Western-blot鉴定FAK的沉默效应。结果:质粒酶切证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo载体中;pSi-lencer-FAK转染细胞后,FAK基因的表达受到明显抑制。结论:成功构建了针对人FAK的siRNA表达载体,通过转染Tca8113细胞可有效地抑制细胞中FAK的表达。