shRNA对EC9706细胞p70S6K表达的影响

作     者：郭三星 侯桂琴 李杰 张艳 贝维娟 薛乐勋 GUO Sanxing;HOU Guiqin;LI Jie;ZHANG Yan;BEI Weijuan;XUE Lexun

作者机构：郑州大学第一附属医院肿瘤细胞研究室郑州450052 郑州大学药学院郑州450001 郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州450001 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2011年第46卷第1期

页      面：7-9页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目30901778 教育部"十.五" "211工程"重点学科建设项目教重字第2号 

主　　题：食管肿瘤 EC9706 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 核糖体40s小亚基S6蛋白激酶 短发夹RNA 

摘      要：目的:观察核糖体40s小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)特异性短发夹RNA(shRNA)对EC9706细胞p70S6K表达的影响。方法:根据GenBank p70S6K的mRNA序列,设计并合成p70S6K特异性的shRNA序列,退火形成双链后插入pSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体,构建表达载体pshRNA-p70S6K,转染EC9706细胞。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染24、48、72、96及120h后细胞中p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K的表达,设未转染的EC9706细胞为对照。结果:各组细胞p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K蛋白的表达差异有统计学意义(F=106.343,721.632,P均0.001)。转染细胞p70S6K mRNA的表达在转染24、48和72h后均较对照组下降(P0.05),在第48h表达最低;磷酸化p70S6K蛋白的表达在转染24、48、72和96h后均较对照组下降(P0.05),第48h表达最低。结论:p70S6K特异性shRNA能够下调EC9706细胞中p70S6K mRNA和蛋白的表达。