女性间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征患者尿源干细胞的提取与鉴定

作     者：孙碧韶 赵江 董兴有 杨杨 罗兴 张腾 刘骞 杨振兴 徐杰 李龙坤 Sun Bishao;Zhao Jiang;Dong Xingyou;Yang Yang;Luo Xing;Zhang Teng;Liu Qian;Yang Zhenxing;Xu Jie;Li Longkun

作者机构：陆军军医大学第二附属医院泌尿外科重庆40037 

出 版 物：《中华泌尿外科杂志》 (Chinese Journal of Urology)

年 卷 期：2019年第40卷第8期

页      面：567-573页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：陆军军医大学学科交叉与国际合作项目(2016YXKJC03) 

主　　题：膀胱炎,间质性 膀胱疼痛综合征 尿液 干细胞 提取 鉴定 

摘      要：目的探讨女性间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)患者尿源干细胞(USCs)的分离培养技术。方法收集2018年6—12月陆军军医大学第二附属医院收治的6例女性IC/BPS患者的新鲜中段尿液用于分离培养USCs。患者年龄33~55岁,平均41.5岁;病史2~18年,平均8年。取6例患者尿液多次稀释、离心后得到细胞沉淀,用特殊培养基贴壁培养并传代。记录初始细胞克隆数,观察各代细胞形态,CCK-8实验检测USCs增殖能力,流式细胞术检测USCs细胞周期及表面标志物表达情况,免疫荧光染色法检测USCs及其分化为平滑肌、上皮细胞后表面标志物的表达情况。结果细胞贴壁后,培养3~5 d即可见细胞克隆,6例中3例成功提取到USCs,克隆数分别为(3.7±0.9)、(3.7±1.2)、(5.7±0.9)个,提取成功率达50%。细胞外观呈梭形;增殖1~8 d后,CCK-8测吸光度A值分别为0.11、0.25±0.02、0.51±0.06、0.74±0.07、1.20±0.09、1.72±0.01、2.07±0.05、2.17±0.04,增殖曲线呈对数生长。细胞周期检测结果示(80.4±0.1)%的细胞处于G1期,(15.4±0.1)%处于G2/M期,(4.2±0.2)%处于S期。流式细胞术及免疫荧光染色检查结果均显示细胞不表达造血干细胞表面标志物CD31、CD34、CD45,表达间充质干细胞表面标志物CD44、CD73、CD105、CD133,表达胚胎干细胞表面标志物阶段特异性胚胎表面抗原4(SSEA4),表达肾周细胞表面标志物CD146、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRB)、NG2。诱导分化为平滑肌和上皮细胞后,表达平滑肌细胞表面标志物Desmin、Myosin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Vimentin和上皮细胞表面标志物Uroplakin 1A、Uroplakin 3B、广谱细胞角蛋白(AE1/AE3)、Cytokeratin13。结论本研究采用多次离心和贴壁培养的方法,得到了具有快速增殖和多向分化能力的USCs,成功建立了女性IC/BPS患者USCs的提取方法,为探讨USCs应用于IC/BPS患者自体治疗的临床研究提供了实验基础。