对硫磷纳米抗体筛选及分子识别机制研究

作     者：张玉琪 张瑾如 王锋 李家冬 司睿 吕丽珊 沈玉栋 王弘 HAMMOCK Bruce D 孙远明 ZHANG Yu-Qi;ZHANG Jin-Ru;WANG Feng;LI Jia-Dong;SI Rui;LYU Li-Shan;SHEN Yu-Dong;WANG Hong;HAMMOCK Bruce D;SUN Yuan-Ming

作者机构：华南农业大学食品学院广东省食品质量与安全重点实验室畜禽产品精准加工与安全控制技术国家地方联合工程研究中心(广东) 广州安诺科技股份有限公司 Department of Entomology and UCD Comprehensive Cancer CenterUniversity of CaliforniaDavis 

出 版 物：《分析化学》 (Chinese Journal of Analytical Chemistry)

年 卷 期：2019年第47卷第9期

页      面：1419-1428页

核心收录：

学科分类：090403[农学-农药学(可授农学、理学学位）] 07[理学] 070205[理学-凝聚态物理] 08[工学] 09[农学] 080501[工学-材料物理与化学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 0904[农学-植物保护] 0702[理学-物理学] 

基　　金：十三五重点研发计划项目(Nos.2016YFE0106000,2018YFC1602904) 广州市科技计划项目(No.201804020077) 广东省重点领域研发计划项目(No.2019B020211002) 广东省高等学校珠江学者岗位计划项目(2017)资助~~ 

主　　题：纳米抗体 对硫磷 噬菌体展示 分子模拟 

摘      要：对硫磷是一种广谱的有机磷酸酯类杀虫、杀螨剂,毒性极强,可对环境和人类健康造成严重危害。尽管我国已禁止使用对硫磷,但仍存在违禁使用现象,加强对其监测十分必要。纳米抗体是已知最小的与抗原结合的片段（15 kDa）,来源于骆驼科动物体内重链抗体的可变区,具有稳定性强、灵敏度高、易表达、水溶性好等特性。本研究基于噬菌体展示技术构建了抗对硫磷纳米抗体库,其库容为2.41×10;cfu/mL,经抗原-抗体固相亲和筛选及噬菌体酶联免疫法（Phage ELISA）鉴定,获得5种抗对硫磷纳米抗体VHH1、VHH6、VHH13、VHH21和VHH24。以结合能力最强的VHH1为基础,采用同源建模和分子对接技术探讨VHH1与对硫磷分子的识别机制,发现VHH1与对硫磷存在氢键和疏水间分子作用力,关键氨基酸是Ser60、Lys104、Phe105、Gly106和Arg107。本研究为抗体的进化改造和半抗原的设计提供了新思路。