通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备

作     者：刘静 任志广 王铁成 李元果 孙伟洋 冯娜 秦川 高玉伟 夏咸柱 LIU Jing;REN Zhi-guang;WANG Tie-cheng;LI Yuan-Guo;SUN Wei-yang;FENG-Na;QIN chuan;GAO Yu-wei;XIA Xian-zhu

作者机构：北京协和医学院中国医学科学院医学实验动物研究所北京100021 军事医学科学院军事兽医研究所 河南大学医学院 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2019年第14卷第7期

页      面：755-760页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(No.2016YFD0500203 2017YFD0501705) 

主　　题：流感病毒 基因优化 HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e NP M1 病毒样颗粒 

摘      要：目的高致病性H5N1亚型流感病毒可感染人,并不断衍生出多个新的基因谱系,存在着大规模流行的可能性。我国现有的商品化疫苗无法对不同谱系的H5N1流感病毒感染提供有效的保护。病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗具有良好的免疫原性和安全性,成为近年研究的热点。本研究旨在建立H5亚型禽流感病毒通用型病毒样颗粒疫苗的制备方法。 方法将优化的H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.***.2.1)亚型流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e(5个M2e)/HL5M2e(5M2e替代HA的头部嵌入HLHA)、NP基因和M1基因分别插入pFast-BacDual载体,得到相应的重组供体。然后将重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。 结果酶切和PCR鉴定表明成功构建了含目的基因的重组杆粒Bacmid-(HLHA/5M2e/HL5M2e、NP、M1)。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,IFA试验和Western blot试验皆证实,优化的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP基因和M1基因编码的蛋白均获得表达。透射电子显微镜观察VLPs转染Sf9细胞上清的浓缩液中,有球形结构和100nm左右典型VLPs存在。 结论在Sf9昆虫杆状病毒表达系统中成功表达H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.***.2.1)亚型禽流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP和M1蛋白,并组装成3种VLPs,为进一步研究流感病毒的VLPs疫苗奠定了基础。