应用四倍体补偿技术建立血友病A小鼠模型

作     者：匡颖 王津津 卢希彬 陆顺元 张良梁 沈春玲 费俭 王铸钢 KANG Ying;WANG Jin-jin;LU Xi-bin;LU Shun-yuan;ZHANG Liang-liang;SHEN Chun-ling;FEI Jian;WANG Zhu-gang

作者机构：上海南方模式生物研究中心201210 上海交通大学医学院医学遗传学教研室 上海交通大学医学院附属瑞金医院 中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所 同济大学生命科学与技术学院 

出 版 物：《中华医学遗传学杂志》 (Chinese Journal of Medical Genetics)

年 卷 期：2010年第27卷第1期

页      面：1-6页

核心收录：

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30570971) “十一五”科技支撑计划重大专项(2006BAI23B02) 上海市科委创新团队项目(06DZ05907) 

主　　题：血友病A 基因剔除 凝血因子Ⅷ 四倍体囊胚补偿技术 

摘      要：目的建立凝血因子Ⅷ（factorⅧ，FⅧ）基因剔除小鼠模型，为研究治疗血友病A提供理想的动物模型。方法应用ET克隆、胚胎干细胞同源重组和四倍体囊胚补偿技术，将小鼠F阿基因第16～19外显子靶向剔除，并应用PCR、逆转录PCR（reverse transcriptase-PCR，RT-PCR）及免疫组织化学染色技术，从DNA、RNA、蛋白水平检测FⅧ基因的转录及表达情况。通过检测激活的部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）和FⅧ的促凝活性（FⅧ：C）进行FⅧ基因剔除小鼠表型鉴定。结果PCR检测在剔除小鼠中未扩增出FⅧ基因的条带；RT—PCR分析显示剔除区域该基因mRNA转录本缺失；免疫组织化学染色显示在雄性半合子（-／y）和雌性纯合子（-／-）小鼠的肝脏中凝血因子Ⅷ表达缺失；FⅧ：C和APTT检测结果显示雌性杂合子（＋／-）FⅧ活性为野生型（wt）的80％，其APTT值较wt略有延长，而-／y和-／-小鼠的FⅧ的活性仅为wt小鼠的8％和10％，且APTT值均大于120s。结论FⅧ基因剔除小鼠具有与人类血友病A患者相似的表型，它的建立将促进我国血友病A治疗新技术的发展。