人骨髓间充质干细胞分化为上皮样细胞的初步研究

作     者：侯光辉 叶楠 吴静 徐锦堂 施文建 陈义 刘小浩 张泽华 HOU Guang-hui;YE Nan;LIU Xiao-hao;ZHANG Ze-hua

作者机构：广东省珠海市人民医院暨南大学医学院珠海医院眼科519000 暨南大学医学院眼科学研究室 

出 版 物：《中华眼科杂志》 (Chinese Journal of Ophthalmology)

年 卷 期：2010年第46卷第8期

页      面：719-724页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：珠海市科技重点项目(PB20051014) 国务院侨办重点学科项目(51205004) 

主　　题：间质干细胞 细胞分化 角膜 上皮样细胞 组织工程 

摘      要：目的 应用猪板层角膜做载体将人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSC）跨胚层诱导为上皮样细胞,甚至角膜上皮样细胞,初步探讨hMSC作为构建组织工程角膜种子细胞的可行性.方法 实验研究.用密度梯度离心培养技术结合贴壁培养法分离纯化hMSC并传代,对体外培养的hMSC进行免疫表型鉴定.将传代后的hMSC接种于去上皮的猪角膜基质片前弹力层表面培养诱导分化,免疫荧光检测角膜上皮细胞标志物角蛋白12（CK12）以及角膜缘干细胞标记物ABCG2和CK19的表达.运用体外培养的方法使种植在前弹力层表面的细胞复层化.待细胞融合形成单层后,置入插入式培养皿中进行气液界面培养.培养4周后进行HE染色及免疫组织化学检测,光镜下观察其复层情况.结果 获得的hMSC可以在体外培养扩增,表现出很强的增殖潜能.流式细胞仪示：培养的hMSC CD45阳性率为0.06%,CD34为0.41%,CD44为86.43%,CD29为85.72%,CD105为90.72%.诱导4周后部分细胞表达CK12和CK19,不表达ABCG2.运用气液界面培养法进行体外复层的结果显示可以形成1～2层的上皮样细胞,并很可能为角膜上皮样细胞.结论 在本实验的诱导条件下,hMSC可以分化为上皮样细胞,并很可能为角膜上皮样细胞,hMSC有可能作为组织工程技术角膜上皮重建的种子细胞的选择.