白粉菌侵染后的拟南芥酵母双杂交cDNA文库构建及其利用

作     者：黄衍焱 杨玲珑 王莹 李冉 鲁黎明 王文明 HUANG Yan-yan;YANG Ling-long;WANG Ying;LI Ran;LU Li-ming;WANG Wen-ming

作者机构：四川农业大学水稻研究所成都611130 四川农业大学农学院成都611130 

出 版 物：《植物病理学报》 (Acta Phytopathologica Sinica)

年 卷 期：2015年第45卷第4期

页      面：370-375页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 

基　　金：国家自然科学基金(31071670) 

主　　题：RPW8 白粉菌 拟南芥 cDNA文库 酵母双杂交 

摘      要：拟南芥广谱抗病基因RPW8对拟南芥白粉病菌、霜霉病菌和烟草花叶病毒等均具有抗性。为了深入研究其广谱抗病机制,筛选鉴定与RPW8具有直接相互作用的蛋白,我们以含有RPW8的拟南芥纯合转基因系S5为材料,接种拟南芥白粉菌系UCSC1,36 h后取样,构建了白粉菌侵染初期的拟南芥cDNA文库。为了提高文库对长片段基因5 端的覆盖率,分别使用含有oligo(d T)和oligo(d N)的接头引物反转录c DNA第一链,PCR扩增双链c DNA。将纯化后的双链c DNA与线性化载体p GADT7-Rec混合,利用同源重组技术在酵母菌株Y187中构建c DNA文库。经检测,文库转化效率为5.0×106/3μg p GADT7-Rec,滴度为2.5×108CFU·m L-1,插入片段长度在350~2 000 bp之间,平均插入片段大小为750 bp。用RPW8.1和RPW8.2构建诱饵载体,分别获得11和12个候选互作蛋白。结果表明此c DNA文库质量较好,适用于互作蛋白的筛选。