人胰岛素原的N-糖基化修饰及在昆虫细胞中的表达

作     者：车凤玉 刘子瑜 张业顺 张国政 韦亚东 

作者机构：江苏科技大学生物与化学工程学院江苏镇江212018 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018 

出 版 物：《蚕业科学》 (ACTA SERICOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2013年第39卷第3期

页      面：522-526页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：人胰岛素原 昆虫细胞 N-糖基化修饰 重组杆状病毒 

摘      要：人胰岛素为非糖基化修饰的蛋白质类激素,在生物体内的半衰期非常短。利用蛋白质经N-糖基化修饰后可以增强生物活性并延长其生物半衰期的特点,对人胰岛素原基因进行DNA重组改造,在其B链的N端添加保守性的N-糖基化位点后,克隆入ph/sp质粒,并转化至*** AcDH10Bac细胞,获得重组杆状病毒质粒Bacmid-Ig,然后转染Sf21细胞,获得含有N-糖基化位点的人胰岛素原基因(Ig)的重组杆状病毒。用Western blotting方法在感染此重组病毒的Sf21细胞中检测到分子质量约20 kD的经过N-糖基化修饰的人胰岛素原蛋白,并且在添加衣霉素的细胞表达产物中检测到该蛋白质的分子质量变小。研究结果表明,人胰岛素原在昆虫细胞中获得了表达并且被糖基化修饰。