分枝杆菌Mycobacterium Neoaurum NwIB-01 3-甾酮-Δ~1-脱氢酶基因的克隆表达

作     者：张成刚 王风清 魏东芝 ZHANG Cheng-gang;WANG Feng-qing;WEI Dong-zhi

作者机构：华东理工大学生物工程学院鲁华生物技术研究所上海200237 

出 版 物：《化学与生物工程》 (Chemistry & Bioengineering)

年 卷 期：2011年第28卷第7期

页      面：39-43页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：中国博士后基金资助项目(20100470757) 

主　　题：3-甾酮-Δ1-脱氢酶 分枝杆菌 染色体走读 

摘      要：通过分析已知两种分枝杆菌的3-甾酮-Δ1-脱氢酶(kstD)碱基保守序列,设计简并引物,以甾醇降解菌株Mycobacterium neoaurumNwIB-01的DNA作模板,得到一个kstD基因片段,通过染色体走读,得到其完整的阅读框。以pUC18为异源表达载体,构建pTQ002表达质粒,在***5α中对kstD进行了胞内活性表达,测定Mycobacteri-um neoaurumNwIB-01 kstD酶活为(0.37±0.05)***-1,约为原酶活的一半,为构建高效转化生成3-酮基-1,4-二烯类固醇的基因工程菌奠定了基础。