应用CRISPR/Cas9敲除HeLa细胞DDX21基因对新城疫病毒复制的影响

作     者：武炜 王飒 孟春春 仇旭升 廖瑛 谭磊 宋翠萍 刘炜玮 孙英杰 丁铲 WU Wei;WANG Sa;MENG Chunchun;QIU Xusheng;LIAO Ying;TAN Lei;SONG Cuiping;LIU Weiwei;SUN Yingjie;DING Chan

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 福建农林大学动物科学学院福州350002 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2019年第50卷第7期

页      面：1433-1440页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31872453) 国家自然科学基金重点项目(31530074) 国家重点研究开发计划(2018YFD0500100) 

主　　题：CRISPR/Cas9 DDX21 新城疫病毒 复制 

摘      要：解旋酶家族是一类对所有生物都至关重要的酶,主要功能是基因解旋,DEAD/H-box家族RNA解旋酶是一类重要的解旋酶。DEAD-box RNA解旋酶DDX21被证实可能调控宿主细胞先天性免疫。新城疫病毒(NDV)是一种对养禽业危害严重的病原,NDV能够通过多种手段调控宿主先天性免疫,为了探讨DDX21如何调控NDV复制,本研究应用CRISPR/Cas9系统建立DDX21基因敲除的HeLa细胞系,并验证其对NDV复制的影响。针对DDX21基因共设计6条sgRNA,构建敲除载体并电转染细胞,通过药物筛选、亚克隆筛选后,以PCR和Western blot进行敲除效率的双重鉴定,并比较野生型和DDX21敲除细胞中NDV的复制效率。结果显示,由于DDX21对细胞生长至关重要,因此仅获得一株DDX21杂合子敲除细胞,Western blot结果显示DDX21表达量被显著抑制,NDV对在敲除细胞上的复制滴度明显低于野生型细胞,说明DDX21发挥正调控NDV复制的作用,本试验为DDX21调控抗病毒先天性免疫研究奠定了基础。