难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序

作     者：李明 申晓冬 丛延广 谭银玲 饶贤才 胡福泉 LI Ming;SHEN Xiao-dong;CONG Yan-guang;TAN Yin-ling;RAO Xian-cai;HU Fu-quan

作者机构：第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2006年第28卷第6期

页      面：539-542页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30270065)~~ 

主　　题：大片段克隆 噬菌体 基因组测序 PaP1 

摘      要：目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。