猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：张雪 杨倩 于红欣 王俊 孟凡伟 周双海 ZHANG Xue;YANG Qian;YU Hong-xin;WANG Jun;MENG Fan-wei;ZHOU Shuang-hai

作者机构：北京农学院动物科学技术学院北京102206 北京市怀柔区动物疫病预防控制中心北京101400 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2015年第45卷第6期

页      面：644-648页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：天津市宁河原种猪场科技计划项目(2011) 

主　　题：猪传染性胃肠炎病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR 早期快速诊断 

摘      要：为了建立一种定量检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的实时荧光定量PCR方法,用RT-PCR扩增TGEV的M基因片段,构建含有TGEV M基因片段的重组质粒。用系列稀释后的重组质粒为模板,基于SYBR GreenⅠ来进行检测TGEV的实时荧光定量PCR扩增。结果显示,扩增效率为103.0%,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物的熔解曲线具有单一整齐的峰,标准曲线具有优良的线性关系,最低可准确检测63copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%。用建立的PCR对3种常见猪源RNA病毒的检测结果均为阴性,对65份临床样品的检出率高于常规PCR。结果表明,建立了一种灵敏度高、特异性强、重复性好的检测TGEV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,可用于TGEV的定量检测和猪传染性胃肠炎的早期快速诊断。