抗草甘膦与磷高效吸收基因双价表达载体的构建及对甘蓝型油菜的遗传转化
Construction of bivalent expression vectors with tolerating glyphosate and efficient phosphorus uptake genes and genetic transformation of Brassica napus作者机构：甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室甘肃省干旱生境作物学重点实验室甘肃农业大学农学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学资源与环境学院甘肃兰州730070
出 版 物：《甘肃农业大学学报》 (Journal of Gansu Agricultural University)
年 卷 期：2019年第54卷第3期
页 面：31-39,46页
基 金：国家自然科学基金项目(31260343) 甘肃省生物技术专项项目(GNSW-2015-11)
主 题：甘蓝型油菜 植酸酶基因 遗传转化 特异性启动子 qRT-PCR
摘 要：【目的】甘蓝型油菜是产油效率较高的油料作物,在其生长过程中往往伴随着土壤环境中磷素匮乏及杂草胁迫,严重影响着最终产量和品质.因此,同时解决有效磷匮乏及草害问题已经成为目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了与草甘膦抗性(eCTP和EPSPS)和磷高效吸收(Pht1;2和phyA )的相关目的基因,随后构建了双价植物表达载体,通过农杆菌介导法转化甘蓝型油菜,对转化植株进行PCR检测筛选,并通过qRT-PCR法对筛选的阳性植株内目的基因的表达进行定量分析.【结果】将PCR扩增得到的片段经琼脂糖凝胶电泳检测,结果符合预期.测序结果也与GenBank注册序列同源性高度一致,可用于后续试验.对转基因油菜进行草甘膦抗性筛选和PCR扩增检测,共获得5株转基因阳性植株.实时荧光定量结果发现转基因阳性植株内 phyA和EPSPS 基因的表达量均较对照植株有显著提高.【结论】本研究成功构建了抗草甘膦和磷高效吸收基因双价植物表达载体,获得的转基因阳性植株同时兼具草甘膦抗性及磷素高效吸收利用的特性,为培育甘蓝型油菜优良种质资源提供了理论依据.
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