人pre-miR-145真核表达载体的构建及其对胃癌细胞游走、侵袭活性的影响

作     者：张桓瑜 梁铸林 郑丽端 童强松 董继华 ZHANG Huan-yu;LIANG Zhu-lin;ZHENG Li-duan;TONG Qiang-song;DONG Ji-hua

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院外科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室武汉430022 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2011年第28卷第4期

页      面：571-573页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：基金项目：国家自然科学基金资助项目（30200284、30600278、30772359、81071997、81072073） 教育部“新世纪优秀人才支持计划”资助项目（NCET-06-0641） 教育部回国人员基金资助项目（2008889） 

主　　题：微小RNA145 胃癌 表达载体 

摘      要：目的构建人微小RNAl45（miR-145）前体的真核表达载体，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pPG-miR-EGFP载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901，实时定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞中miR．145表达水平，黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的pPG—miRl45-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配；重组质粒转染SGC．7901细胞后，miR-145表达分别上调20．45倍（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降51．5％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降30．4％（P〈0．01）。结论成功构建人pre—miR-145真核表达载体，转染胃癌细胞过表达后，能抑制癌细胞的游走和侵袭能力。