贝类派琴虫和单孢子虫二重荧光定量PCR方法的建立

作     者：谢丽基 谢芝勋 庞耀珊 刘加波 邓显文 谢志勤 XIE Li-ji;XIE Zhi-xun;PANG Yao-shan;LIU Jia-bo;DENG Xian-wen;XIE Zhi-qin

作者机构：广西兽医研究所广西南宁530001 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2010年第30卷第7期

页      面：917-921页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家百千万人才工程人选专项资金项目(945200603) 广西科技攻关资助项目(桂科攻0630001-3M) 

主　　题：派琴虫 单孢子虫 二重荧光定量PCR 

摘      要：根据基因库中派琴虫和单孢子虫基因组的保守序列,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能够同时检测派琴虫和单孢子虫的二重荧光定量PCR方法。该方法特异性好,对派琴虫和单孢子虫的检测敏感性分别达到400和40个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对派琴虫和单孢子虫不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这2个原虫。对广西沿海的49份贻贝病料进行检测,结果派琴虫阳性率为16.3%,检测的派琴虫含量为2.38×106～9.21×102拷贝/μL;提示派琴虫广泛存在于中国南方沿海的养殖贝类中,建立的荧光定量PCR方法可以用于贝类派琴虫的临床快速检测。该方法对单孢子虫检测的敏感性比派琴虫高,而49份贻贝病料未检出单孢子虫,提示需要进行更多临床样品的检测。