云南松SSR-PCR反应体系的建立与优化

作     者：张瑞丽 许玉兰 王大玮 吕学辉 何承忠 段安安 Zhang Ruili;Xu Yulan;Wang Dawei;Lü Xuehui;He Chengzhong;Duan Anan

作者机构：西南林业大学西南山地森林保育与利用省部共建教育部重点实验室昆明650224 北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2012年第28卷第4期

页      面：93-97页

学科分类：0907[农学-林学] 08[工学] 0829[工学-林业工程] 09[农学] 

基　　金：西南林业大学科技创新基金项目(1105) 云南省自然科学基金项目(2010CD065) 北京林业大学林木育种国家工程实验室开放基金项目(FOP2010-10) 云南省教育厅重点项目(2010Z042) 

主　　题：云南松 SSR 优化 正交设计 

摘      要：为了建立适宜云南松SSR-PCR的反应体系和扩增程序,利用近缘种火炬松的引物,采用正交设计L16(45)对云南松SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了适于云南松的SSR反应体系。在10μL的反应体系中,模板DNA的用量为30.0 ng,TaqDNA聚合酶的用量为1.0 U,Mg2+的浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物的浓度为0.2μmol/L。扩增程序为:94℃预变性4 min;94℃变性45 s,48℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环;72℃延长10 min,4℃保存。最后利用1个居群对该体系进行稳定性验证,结果可用于云南松SSR标记的研究。