牛病毒性腹泻病毒内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法的建立及初步应用

作     者：季新成 史茜 郭春娟 王科珂 冉多良 JI Xin-cheng;SHI Qian;GUO Chun-juan;WANG Ke-ke;RAN Duo-liang

作者机构：新疆出入境检验检疫局新疆乌鲁木齐830063 新疆农业大学新疆乌鲁木齐830052 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第36卷第8期

页      面：646-650页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：新疆自治区高技术研究发展项目(201010101201141147) 国家质量监督检验检疫总局科研项目(2011IK011 2011IK017) 

主　　题：牛病毒性腹泻病毒 内标 共扩增 TaqMan荧光RT-PCR 

摘      要：为建立牛病毒性腹泻病毒（BVDV）内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法,本研究根据BVDV 5＇-UTR区序列设计引物和荧光标记探针,通过重叠延伸PCR（SOE-PCR）扩增获得内标模板,经体外转录得到可以作为内标物的cRNA。经反应条件的优化,建立了BVDV内标双重TaqMan荧光RT-PCR检测体系。结果表明：当cRNA浓度为103拷贝/μL时,二者均有较好的扩增曲线;该方法对I型BVDV的检测灵敏度为0.25 TCID50,对II型BVDV的检测灵敏度为2.5 TCID50;利用该方法对猪瘟病毒等其他相关核酸的检测结果均为阴性;重复性检测Ct值变异系数为0.54~4.73。对506份临床样品检测,结果有23份样品为阳性,阳性样品检出数量和编号与不含内标的单一荧光RT-PCR方法完全一致,表明该方法可以用来对BVDV进行准确、快速检测,并且可以对检测结果进行质量监控。