H_3N_2亚型犬流感病毒鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的制备与活性分析

作     者：赵丹 邱冬 韩德敏 刘永杰 ZHAO Dan;QIU Dong;HAN Demin;LIU Yongjie

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省动物疫病预防控制中心江苏南京210036 

出 版 物：《南京农业大学学报》 (Journal of Nanjing Agricultural University)

年 卷 期：2019年第42卷第3期

页      面：474-481页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 090603[农学-临床兽医学] 0830[工学-环境科学与工程（可授工学、理学、农学学位）] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2017YFD0501101) 科技部国际合作专项(2014DFG32770) 

主　　题：H3N2亚型 犬流感病毒 单链抗体 嵌合抗体 犬源化 

摘      要：[目的]为减少鼠源单克隆抗体的异源性在犬临床治疗中引起的宿主免疫排斥反应,针对H_3N_2亚型犬流感病毒(CIV),制备具有犬源抗体恒定区基因(Fc)的鼠/犬嵌合抗体。[方法]从产生具有良好中和活性CIV单抗的鼠源杂交瘤细胞株中扩增抗体重链和轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得单链抗体基因(scFv)片段,同时从犬外周血单核细胞中扩增得到犬源抗体Fc片段;分别构建单链抗体与嵌合抗体表达载体,通过大肠杆菌表达、纯化后调整蛋白浓度为1 mg·mL^(-1),检测单链抗体与嵌合抗体的ELISA和血凝抑制(HI)效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性。[结果]获得的H_3N_2亚型CIV鼠源scFv的相对分子质量为45×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶640(1.56μg·mL^(-1))和1∶160(6.25μg·mL^(-1)),中和效价为1∶160(6.25μg·mL^(-1));鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的相对分子质量为80×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶2 560(0.39μg·mL^(-1))和1∶640(1.56μg·mL^(-1)),中和效价为1∶40(25μg·mL^(-1))。[结论]成功制备了H_3N_2亚型CIV鼠/犬嵌合抗体,为犬流感的临床治疗提供了物质基础。