甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物RNA3序列分析及编码25kD蛋白基因在大肠杆菌中的表达

作     者：李大伟 于嘉林 韩成贵 邢怡明 刘仪 陈受宜 

作者机构：中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 中国科学院遗传所 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：1998年第14卷第2期

页      面：165-171页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：国家自然科学基金 

主　　题：甜菜 坏死 黄脉病毒 RNA3基因组 序列分析 

摘      要：以甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）内蒙分离物的总ＲＮＡ为模板，通过反转录－ＰＣＲ扩增获得ＢＮＹＶＶＲＮＡ３全长ｃＤＮＡ。将其克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）上，得到重组质粒ｐＧＢＹ５６。序列分析结果表明，内蒙分离物ＲＮＡ３基因组全长为１７７５ｎｔ，其中包含３个开放阅读框架，分别编码２５ｋＤ蛋白、４．６ｋＤ蛋白和一种由５９个氨基酸组成的Ｎ蛋白。与法国Ｆ２分离物、德国Ｇ１分离物和日本Ｓ分离物相比，其核苷酸序列的同源性分别为９６．４％、９６．８％和９７．３％。将２５ｋＤ蛋白编码基因克隆到ｐＪＷ２上，构建了该基因的原核表达载体。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析结果表明，２５ｋＤ蛋白基因在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中经温度（４２℃）诱导后。