绿绒蒿SSR-PCR反应体系的建立与优化

作     者：熊健 屈燕 冷秋思 赵琬玥 

作者机构：西南林业大学园林植物与观赏园艺省高校重点实验室/西南林业大学园林学院云南昆明650224 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2019年第47卷第8期

页      面：60-63页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(编号:31460218) 云南省高校重点建设学科(风景园林学)建设项目 云南省农业基础研究联合专项[编号:2017FG001(-68)] 国家级质量工程园林专业综合改革试点项目(编号:50126002) 

主　　题：绿绒蒿 SSR PCR体系优化 

摘      要：为建立适合绿绒蒿属(Meconopsis Vig.)的SSR反应体系,以多刺绿绒蒿(***)为试材,应用L_(25)(5~6)进行正交试验,对影响SSR-PCR的主要因素进行优化。结果发现,Mg^(2+)对PCR反应效果影响最大,而dNTPs的影响最小。5个因素水平的变化对绿绒蒿属SSR-PCR反应体系的影响从大到小依次为Mg^(2+)Taq酶含量引物浓度DNA模板量dNTPs浓度。适宜绿绒蒿属的SSR反应体系:总体积25μL,Mg^(2+)浓度2 mmol/L,dNTPs浓度0.2 mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,DNA模板量60 ng,Taq聚合酶量1.6 U,其余用ddH_2O补充。扩增程序为94℃1.5 min;94℃20 s,最适退火温度20 s,72℃1 min,共35个循环;72℃5 min;4℃保存。利用优化后的反应体系对同属另外8种绿绒蒿(***、***、***、***、***、*** Pinky、***、***)进行PCR扩增,均获得优良的扩增产物。因此,该试验建立的反应体系适用于绿绒蒿属植物的SSR-PCR反应。