新生儿惊厥相关基因KCNQ2定点突变及其蛋白表达的研究

作     者：周熙惠 惠智艳 史瑞明 宋红霞 张葳 刘俐 ZHOU Xi-Hui;HUI Zhi-Yan;SHI Rui-Ming;SONG Hong-Ma;ZHANG Wei;LIU Li

作者机构：西安交通大学医学院第一附属医院新生儿科/环境与疾病相关基因教育部重点实验室离子通道研究病室陕西西安710061 

出 版 物：《中国当代儿科杂志》 (Chinese Journal of Contemporary Pediatrics)

年 卷 期：2011年第13卷第8期

页      面：611-616页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：陕西省科学技术攻关项目(2007K14-05) 

主　　题：KCNQ2基因 定点突变 真核表达载体 

摘      要：目的在收集的1个良性家族性婴儿惊厥家系中发现KCNQ2基因c.812GT(p.G271V)突变,探讨c.812GT突变体及其真核表达载体的构建方法,并观察其在人胚肾(HEK)293细胞中的表达。方法利用重叠延伸PCR和限制性内切酶法构建KCNQ2基因c.812GT突变体真核表达载体pcDNA3.0-c.812GT-KCNQ2,用脂质体转染法将KCNQ2质粒(野生型pcDNA3.0-KCNQ2或突变型pcDNA3.0-c.812GT-KCNQ2)与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜下观察HEK293细胞,免疫荧光化学法检测蛋白质表达。结果构建的突变体经DNA直接测序示KCNQ2基因cDNA第812位碱基G变为T,突变体在HEK293细胞中成功表达,野生型和突变型基因的蛋白质都在细胞膜上表达,提示KCNQ2钾通道孔区的突变c.812GT并不影响蛋白的正常表达。结论成功构建KCNQ2突变基因真核表达载体,并在HEK293细胞中表达KCNQ2蛋白,为突变型KCNQ2基因的功能研究及癫癎的分子发病机制研究奠定基础。