重组人髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的表达、纯化及免疫原性

作     者：夏君慧 翁益云 李佳 张旭 XIA Jun-hui;WENG Yi-yun;LI Jia;ZHANG Xu

作者机构：温州医学院附属第一医院神经内科浙江温州325000 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2011年第27卷第6期

页      面：1245-1248页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(No.Y2080949) 

主　　题：髓鞘少突神经胶质细胞糖蛋白 脑脊髓炎,实验性自身免疫性 多发性硬化 

摘      要：目的:建立人少突胶质细胞糖蛋白细胞外Ig样结构域(MOGIgd)的硫氧还蛋白(TrxA)融合表达系统,探讨表达产物MOGIgd-TrxA融合蛋白的免疫原性。方法:(1)应用RT-PCR方法,以人脑组织的总RNA为模板扩增出编码MOGIgd的cDNA序列,将MOGIgd cDNA克隆到TrxA融合表达载体pET32a(+)中,重组质粒pET32a-MOGIgd经表型筛选、酶切鉴定及测序鉴定后,转化至BL21(DEB)trxB-宿主菌中经异丙硫代钠-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并通过金属鳌合亲和层析柱进行纯化。(2)C57BL/6小鼠分为MOGIgd-TrxA组(MOG组)、硫氧还蛋白组(TrxA组)及正常对照组(NC组),12只/组,各组以相应抗原乳剂免疫小鼠制作实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型后观察其临床神经功能和组织病理学改变(HE染色和髓鞘Luxol fast blue染色)评价模型质量。结果:(1)成功获取高产量32 kD MOGIgd-TrxA融合蛋白,以包涵体形式表达,纯化后纯度达95%左右。(2)MOG组小鼠75%(9/12)发病,于免疫后第(12.14±2.04)d发病,呈慢性非缓解型病程;发病动物组织切片HE染色和髓鞘染色显示不同程度炎性细胞浸润和髓鞘脱失。结论:成功建立人MOGIgd的TrxA融合表达系统,表达产物MOGIgd-TrxA融合蛋白可作为免疫原诱导EAE动物模型。