用SELEX技术筛选葡萄球菌肠毒素B特异性适配体

作     者：江丽 兰小鹏 曾燕丽 甘龙杰 

作者机构：南京军区福州总医院全军检验医学研究所福州350025 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2009年第27卷第6期

页      面：420-421页

核心收录：

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：全军医学科学技术研究"十一五"计划课题(06G0380) 

主　　题：指数富集的配体进化技术 SEB 适体 磁珠 

摘      要：目的通过指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选能与葡萄球菌肠毒素B(SEB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适配体(aptamer)。方法体外构建一个长度为96个碱基的随机ssDNA文库,与靶物质SEB混合,以磁珠作为固相介质,利用热洗脱方法分离与靶标结合的核苷酸片段,通过PCR反复扩增、富集数个循环。利用荧光素标记适配体,测定筛选过程中各轮结合率;通过地高辛标记适配体,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体进行酶促显色反应,检测适配体的特异性。结果经过13轮筛选,ssDNA文库与SEB的结合百分率从1.1%提高到39.8%。制备的适配体针对SEB的特异性强,与葡萄球菌A蛋白(SPA)及牛血清清蛋白(BSA)无非特异性结合。结论成功利用SELEX技术筛选获得了特异结合SEB的高亲和力的ssDNA适配体,为金黄色葡萄球菌感染的诊断与治疗奠定了基础。