利用乳酸乳球菌AcmA表面展示β-1,3-1,4-葡聚糖酶

作     者：李小华 黄新凤 邵小虎 李林 Xiaohua Li;Xinfeng Huang;Xiaohu Shao;Lin Li

作者机构：华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2009年第25卷第1期

页      面：89-94页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(Nos.30670054 30370026)资助 

主　　题：细胞表面展示 N-乙酰胞壁质酶 葡聚糖酶 全细胞催化剂 

摘      要：采用PCR扩增乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MB191菌株的全长肽聚糖水解酶基因acmA,通过C-末端融合构建了与绿色荧光基因gfp的融合基因acmA-gfp,再连接于表达载体pMG36k上后得到可组成型表达AcmA-GFP融合蛋白的重组质粒pMB137,然后将该质粒电转化导入到乳酸乳球菌AS1.2829中获得重组菌MB137。经SDS-PAGE检测,重组菌MB137可表达预期的分子量约74kD的蛋白质。Western blotting、细胞分级分离组分的荧光活性测定和特异GFP二抗标记的流式细胞仪检测证实GFP被成功锚定在重组菌细胞表面,被锚定蛋白约占总表达融合蛋白的35%。进一步通过从枯草芽胞杆菌BF7658基因组中扩增去信号肽序列的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因gls,来取代pMB137中的gfp,得到携带融合基因acmA-gls的重组质粒pMB138,经导入到乳酸乳球菌AS1.2829后得到重组菌MB138,其全细胞β-1,3-1,4-葡聚糖水解酶的活性约为12U/mL菌液,明显高于对照菌株。