重组人肝刺激因子非融合性蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达和纯化

作     者：刘贺佳 吴媛 杨琳 安威 Liu Hejia;Wu Yuan;Yang Lin;An Wei

作者机构：首都医科大学细胞生物学系 

出 版 物：《首都医科大学学报》 (Journal of Capital Medical University)

年 卷 期：2006年第27卷第4期

页      面：427-430页

学科分类：0710[理学-生物学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 071003[理学-生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30070342)资助项目 

主　　题：人肝刺激因子 原核表达载体 基因表达 

摘      要：目的构建人肝刺激因子(human hepatic stimulator substance,hHSS)体外表达体系。方法hHSS基因片段经PstⅠ和NdeⅠ消化后,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pT7-7载体,通过限制性酶切图谱分析及DNA测序反应鉴定hHSS基因。再将pT7-7-hHSS表达载体转化到BL21(DE3)中表达,通过超滤膜及阴离子交换柱纯化,获得目的蛋白。结果表达产物在15 000处有一明显条带,蛋白质肽指纹图谱分析与预期结果相符,经Western blot杂交印证,该15 000蛋白质为hHSS。结论通过构建pT7-7-hHSS原核表达体系,能正确高效地表达hHSS。