重组腺相关病毒的小量制备与体内体外感染研究
Investigation of mini-preparation of recombinant adeno-associated virus and its infection in vitro and in vivo作者机构:北京理工大学生命学院北京100081
出 版 物:《科技导报》 (Science & Technology Review)
年 卷 期:2015年第33卷第18期
页 面:72-77页
学科分类:1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学]
摘 要:重组腺相关病毒(r AAV)是近年来发展的较为成熟的一种病毒基因载体,常用于过表达或者敲低等动物模型的建立与基因治疗等。本研究使用三质粒共转染的方法,在HEK293细胞中包装出含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的r AAV,通过一系列实验,确定纯化方法为脱氧胆酸钠裂解,高浓度Na Cl去除杂蛋白,最后通过肝素层析柱纯化,经超滤管浓缩后其滴度可达1013gene copys/m L以上。将纯化后的r AAV感染HEK293细胞,通过实验确定使用感染复数为106、感染3 d的细胞能够表达出高水平的EGFP。将r AAV注射入大鼠中脑黑质致密部,经过3周的感染发现,r AAV可以特异性地感染多巴胺能神经元,表达出EGFP。通过以上实验,建立了一个在实验室小量制备r AAV的方法,且此方法制备的r AAV完全满足体内与体外实验的要求。