庆大霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定

作     者：许耀心 龚云飞 陈宗伦 奚茜 戴明雁 吴莹莹 刘啊敏 张明洲 

作者机构：中国计量学院生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫重点实验室浙江杭州310018 杭州迪恩科技有限公司浙江杭州310013 

出 版 物：《现代食品科技》 (Modern Food Science and Technology)

年 卷 期：2014年第30卷第6期

页      面：152-157,256页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：浙江省重点科技创新团队(2010R50028) 浙江省科技成果转化项目(2011E61018) 浙江省重大科技专项重点项目(2012C12013-3) 

主　　题：庆大霉素 人工抗原 碳二亚胺法 多克隆抗体 

摘      要：为研究建立庆大霉素的免疫分析技术，合成庆大霉素人工抗原：采用碳二亚胺法将庆大霉素（gentamicin，GM）偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）上，分别合成免疫原GM-BSA和包被原GM-OVA。通过紫外扫描和SDS-PAGE垂直电泳鉴定证明人工抗原偶联成功。以GM．BSA为免疫原，采用新的动物免疫方案免疫新西兰大白兔，获得抗庆大霉素抗血清。在本次免疫新方案中，在动物的生命周期内获得了多于普通免疫的血清量，在多抗血清的制备上是一次抗体工程上的尝试。通过间接酶联免疫对抗血清效价和灵敏度进行跟踪检测，结果表明抗血清效价在九免后稳定在1：20000左右，IC50则稳定在3ng／mL左右。并在八免血清基础上建立了GM间接竞争ELISA法。结果表明，庆大霉素浓度在0．3-243ng／mL，方法的线性回归方程为y=-0．10091nx＋0．6093和R2=0．9845，方法的检测灵敏度IC50=2．954ng／mL，最低检测限IC10=0．056ng／mL。该研究结果为多抗血清制备在量上的突破提供了思路，同时为研制庆大霉素试剂盒提供了良好的基础。