非分型流感嗜血杆菌Hap_s蛋白的分离纯化

作     者：李婉宜 邝玉 李明远 杨远 蒋中华 姚锋 陈长春 LI Wan-yi;KUANG Yu;LI Ming-yuan;YANG Yuan;JIANG Zhong-hua;YAO Feng;CHEN Chang-chun

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2007年第27卷第12期

页      面：1880-1883页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：Haps蛋白 阳离子交换层析 蛋白纯化 

摘      要：目的优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法。方法采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化Haps蛋白,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280nm波长处的光吸收值(D280),用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的蛋白条带的出现。结果弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液1洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol/LNaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110000D的目的条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现。结论Sepharose CM FF层析柱分离纯化HapS蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100mmol/LNaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果。