利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除Myostatin基因

作     者：杨翠翠 佟慧丽 马兴红 杜巍 刘丹 杨宇 严云勤 Cuicui Yang;Huili Tong;Xinghong Ma;Wei Du;Dan Liu;Yu Yang;Yunqin Yan

作者机构：东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2014年第36卷第7期

页      面：685-690页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：国家转基因专项(编号:2011ZX08007-002)资助 

主　　题：TALENs 牛 Myostatin 敲除 转染 

摘      要：肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因能够负向调节骨骼肌的生长和发育,牛MSTN基因突变会出现双肌特征。文章利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靶向敲除牛胎儿成纤维细胞的MSTN基因,获得敲除MSTN基因的细胞系,为制备MSTN基因敲除牛提供材料。构建一对MSTN基因的TALENs真核表达载体,分别采用PEI转染试剂和电穿孔法进行牛胎儿成纤维细胞的转染,测序结果表明TALEN技术可用于敲除牛MSTN基因,利用T7核酸内切酶1(T7E1)检测其突变效率,结果显示电穿孔转染的敲除效率为20.4%。通过有限稀释法,共获得10个MSTN基因敲除的细胞克隆(包括MSTN-/-和MSTN+/-),其靶位点敲除的碱基数分别是1～20不等,部分会出现移码突变。出现移码突变的细胞系可用于MSTN基因敲除的转基因肉牛的制备。