通过PD-1／PD—L1共刺激通路诱导小鼠胰岛移植免疫耐受的研究

作     者：李涛 朱继业 冷希圣 LI Tao;ZHU Ji-ye;LENG Xi-sheng

作者机构：北京大学人民医院肝胆外科100044 

出 版 物：《中华普通外科杂志》 (Chinese Journal of General Surgery)

年 卷 期：2009年第24卷第1期

页      面：45-48页

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目（30471637） 

主　　题：胰岛移植 免疫耐受 PD—L1 PD-1 共刺激通路 腺病毒载体 

摘      要：目的观察重组腺病毒Ad-PD-L1对诱导小鼠胰岛移植免疫耐受的作用。方法酶切含有小鼠全长PD-L1 cDNA的pSport 1-mCD274质粒，亚克隆到穿梭质粒pShuttle—GFP—CMV（-）上，再通过酶切、连接等方法构建腺病毒骨架质粒pAdxsi—GFP—CMV—PD-L1，转化DH5α感受态细菌，筛选阳性克隆。经酶切、测序鉴定正确，线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增，氯化铯密度梯度离心纯化病毒。链脲霉素（250mg／kg）腹腔注射诱导C57BL/6（H-2b）小鼠糖尿病模型，将C57BL/6小鼠随机分为3组，A为对照组，B为Ad—EGFP处理组，C为Ad—PD—L1处理组，在进行胰岛移植的前1天，经尾静脉输注5×10^8pfu的Ad—PD-L1。将DBA／2（H-2d）小鼠的胰岛移植在糖尿病小鼠肾被膜下。术后监测不同时间各组小鼠的血糖变化及胰岛移植物的存活时间，并观察混合淋巴细胞反应的特异性。结果酶切及测序证实Ad—PD—L1构建成功。Ad—PD—L1在小鼠体内可以高效地表达PD—L1，Ad—PD-L1治疗组胰岛移植物的存活时间明显延长到27．63±3．51d（P〈0．01），混合淋巴细胞反应表明小鼠对供体反应特异性降低。结论通过PD—L1／PD-1共刺激通路可以抑制T细胞的活化，从而延长了胰岛移植物的存活时间。