利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体

作     者：辛艳丽 贾玉艳 王恒梁 邓继先 XIN Yan-li;JIA Yu-yan;WANG Heng-Liang;DENG Ji-Xian

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100071 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2005年第25卷第8期

页      面：45-50页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家"863"计划资助项目(2002AA206621) 

主　　题：细菌人工染色体 λ Red重组系统 β-酪蛋白基因 FLP Southern 同源重组 BAC克隆 鼠 同源序列 

摘      要：采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。