miR-21靶向TLR-4/MyD88信号通路介导冷空气诱导的气道免疫失调

作     者：许瑞 黄华萍 韩忠 李敏超 周向东 XU Rui;HUANG Huaping;HAN Zhong;LI Minchao;ZHOU Xiangdong

作者机构：重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010 海南医学院附属医院呼吸内科海南海口570102 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2016年第36卷第1期

页      面：98-102页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81370111) 国家青年科学基金(81500015)~~ 

主　　题：mi R-21 冷空气 气道 免疫失调 TLR-4/MyD88 

摘      要：目的探讨mi R-21在冷空气诱导的气道上皮免疫功能失调中的作用及其可能的潜在分子机制。方法气-液双相法培养人永生化气道上皮细胞BEAS-2B及16HBE,通过逆转录荧光定量PCR法检测不同时间梯度冷暴露的细胞中内源性mi R-21,mi R-164,mi R-155的水平改变。通过构建TLR-4 3’UTR端及其结合位点突变质粒,并与mi R-21模拟物、mi R-21抑制物以及对照共转染BEAS-2B及16HBE细胞,进行双荧光素酶标记试验证实TLR-4为mi R-21的靶蛋白。利用lipofectamine2000分别将mi R-21模拟物、mi R-21模拟对照物、mi R-21抑制物、mi R-21抑制对照物转染给BEAS-2B及16HBE细胞,并给予常温(37℃)培养或冷暴露(30℃),以Western Blot法检测各实验组TLR-4/My D88蛋白水平。结果低温诱导气道上皮细胞内mi R-21水平提高(P0.05),而mi R-164及mi R-155无显著变化。低温提高气道上皮细胞内mi R-21水平呈时间依赖性。双荧光素酶报告实验证实,TLR-4为mi R-21的直接靶蛋白。Western Blotting法检测结果显示转染mi R-21模拟物的BEAS-2B及16HBE细胞在常温培养下TLR-4/My D88蛋白水平显著低于对照组(P0.05),低温刺激可降低气道上皮细胞内TLR-4/My D88的蛋白水平(P0.05);而使用mi R-21抑制物处理,可部分抑制低温诱导的TLR-4/My D88的蛋白水平下调(P0.05)。结论低温刺激可能通过提高气道上皮细胞内mi R-21水平,降低TLR-4/My D88蛋白水平,影响气道上皮免疫功能。