胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU的建立及其耐药机制的初步探讨

作     者：黎伯培 陈俊强 刘金禄 王震 毛远天 陈业阳 裴明毓 徐瑜杰 

作者机构：广西医科大学第一附属医院胃肠外科南宁530021 

出 版 物：《消化肿瘤杂志（电子版）》 (Journal of Digestive Oncology(Electronic Version))

年 卷 期：2012年第4卷第3期

页      面：163-169页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：广西自然科学基金重点项目(编号2012GXNSFDA239001) 广西医疗卫生重点科研课题基金资助项目(编号重2012067) 广西教育厅科研基金资助项目(编号桂教201012MS062) 广西自然科学基金资助项目(编号桂科自0832113) 

主　　题：多药耐药 氟尿嘧啶 胃癌 凋亡 

摘      要：目的构建耐5-FU的胃癌耐药细胞株,初步探讨细胞发生5-FU耐药的可能机制。方法通过药物耐药间歇冲击并浓度梯度递增法诱导建立胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU。应用MTT法检测亲代细胞对4种化疗药物的IC50并计算耐药指数(RI)。通过MTT法绘制细胞的生长曲线计算细胞倍增时间。流式细胞仪分析细胞周期分布。RT-PCR检测抑癌基因P53、癌基因Bcl-2、促凋亡基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)、死亡相关蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)家族成员(DAPK-1、DAPK-2、DAPK-3)、多药耐药蛋白(multidrug resistance proteins,MRP)亚家族中的MRP-6、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)、切除交叉互补修复基因(excision repair cross-complementing1,ERCC-1)的表达。WesternBlot检测MDR1编码的P糖蛋白(P-gp)的表达水平。结果 SGC-7901/5-FU对5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数分别为6.26、3.71、5.25。SGC-7901与SGC-7901/5-FU细胞倍增时间分别为(30.82±1.46)h和(46.01±4.15)h,SGC-7901/5-FU细胞增殖速率显著变缓(P0.05)。耐药子株SGC-7901/5-FU细胞MDR-1、MRP-6、DAPK-3和P-gp表达显著上调(P0.05)。结论成功构建胃癌耐5-FU细胞株SGC-7901/5-FU,其对顺铂、环磷酰胺具有交叉耐药,耐药机制与细胞周期S期细胞比例减少、G0/G1期细胞比例升高有关,可能与MDR-1、MRP-6、DAPK-3基因及P-gp蛋白表达上调有关。